準(zhǔn)確分析甘草種子質(zhì)量的方法

　　甘草一是屬于豆花蝶形花亞科的灌木狀多年生植物，在中國(guó)主要集中在二北地區(qū)（東北、華北、西北），是中國(guó)的傳統(tǒng)中藥，有“國(guó)老”、“十方九草”之譽(yù)。
　　其主要成分是甘草酸，具有益氣補(bǔ)中、清熱解毒、祛痰止咳、緩急止痛、緩和藥性等功效。甘草莖葉中含有豐富的蛋白質(zhì)和脂肪，是一種優(yōu)良的牧草，甘草對(duì)維護(hù)生態(tài)平衡也起著重要的作用，在食品、飲料、卷煙、化妝品等工業(yè)中也有著廣泛的用途�；�于甘草-廣泛的用途，世界各國(guó)對(duì)甘草的需求量不斷上升，山于對(duì)甘草無計(jì)劃的采挖，使甘草資源遭到少，認(rèn)重破壞。
　　近年來，甘草的人工栽培面積不斷擴(kuò)大。但口前市場(chǎng)上流通的種子絕大部分仍然處于原始生產(chǎn)和自然采集階段，加上長(zhǎng)期重復(fù)使用，種子質(zhì)量逐漸退化，影響其藥材的質(zhì)量。優(yōu)質(zhì)種子是生產(chǎn)優(yōu)質(zhì)藥材的前提條件，筆者對(duì)口前市場(chǎng)上出售的甘草種子進(jìn)行質(zhì)量分析，以闡明中國(guó)口前市場(chǎng)上的甘草種子質(zhì)量狀況，以期為中藥材種子貿(mào)易的規(guī)范化、中藥材生產(chǎn)及其種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的制定提供科學(xué)依據(jù)。
　　1 材料與方法
　　1.1 材料
　　甘草種子，其編號(hào)、產(chǎn)地及購(gòu)買地見表1,實(shí)驗(yàn)于2004年5-8月進(jìn)行。

　　表1 實(shí)驗(yàn)材制
　　1.2 儀器
　　光照培養(yǎng)箱、種子風(fēng)選凈度儀、放大鏡、真空吸種置床儀、電子天平、發(fā)芽盒、濾紙、鑷子、尺子
　　1.3 方法
　　1.3.1 凈度分析
　　扦取30g樣品，在凈度分析桌上將樣品分為凈種子、其它植物種子及雜質(zhì)兩種成分，分離后分別稱重，計(jì)算凈度。
　　1.3.2 測(cè)千粒重
　　扦取1000粒種子，用電子天平測(cè)定其重量，重復(fù)3次。
　　1.3.3 測(cè)量種子大小
　　取50粒種子，排成一排，測(cè)定50粒種子的總直徑。計(jì)算單粒種子的直徑。重復(fù)3次。
　　1.3.4 發(fā)芽試驗(yàn)
　　（1）直接發(fā)芽：將發(fā)芽盒用70%酒精消毒后，盒內(nèi)鋪二層濾紙，加蒸餾水濕潤(rùn)，將100粒種子整齊擺在發(fā)芽盒內(nèi)，25 ℃培養(yǎng)箱內(nèi)光照培養(yǎng)。每天注意往發(fā)芽盒內(nèi)加水，保證發(fā)芽盒的濕潤(rùn)，到試驗(yàn)第l0d統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽數(shù)、硬實(shí)數(shù)。設(shè)3次重復(fù)。
　�。�2）濃硫酸處理發(fā)芽：不同來源種子各取300粒，加入98%濃度的濃硫酸1ml，混拌均勻，浸泡70min，再用清水沖凈。然后按上述方法進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)。到試驗(yàn)第l0d統(tǒng)計(jì)種子發(fā)芽數(shù)、硬實(shí)數(shù)及霉變數(shù)。
　　2 結(jié)果與分析
　　2.1 千粒重
　　從圖1可看出，5份新疆甘草種子的千粒重均在1Og以下，最低為9.225g，最高也僅有9.617g，寧夏和內(nèi)蒙古的甘草種子的千粒重都在11g以上，其中內(nèi)蒙古杭錦旗甘草種子的千粒重達(dá)到12.705g，寧夏同心甘草種子的千粒重達(dá)13.967g。方差分析結(jié)果表明，甘草種子的千粒重在不同產(chǎn)地之間存在著極顯著差異，新疆甘草種子之間千粒重則不存在顯著差異。

　　圖1 不同來源甘草種子的千粒重（9）

　　圖2 不同來源甘草種子的直徑（cm）
　　2.2 種子直徑
　　從圖2可看出，5份新疆甘草種子的直徑較小，均小于0.280cm，寧夏和內(nèi)蒙古甘草的種子直徑均在0.287cm以上，其中內(nèi)蒙古杭錦旗甘草種子直徑達(dá)到0.307cm，方差分析結(jié)果表明，甘草種子直徑在不同產(chǎn)地之間存在極顯著差異，同是新疆產(chǎn)地和同是寧夏產(chǎn)地的甘草種子之間則不存在顯著差異。

　　表2 不同產(chǎn)地甘草種子質(zhì)量分析結(jié)果
　　2.3凈度分析
　　從表1可看出，不同產(chǎn)地不同來源的甘草種子之間凈度差異較大，最高的可達(dá)93.4%，最低的只有58.0%。凈度超過90%的種子只有1份，有5份種子的凈度在80%~90%之間，有4份種子的凈度未超過70%。種子凈度在不同甘草種子樣品之間均存在顯著差異。種子內(nèi)的雜質(zhì)主要是破碎的種子及沙土。

　　圖3 濃硫酸處理前后甘草種子的發(fā)芽率（%）
　　2.4 發(fā)芽率
　　不同來源的甘草種子的發(fā)芽率之間存在著極顯著的差異，有4份甘草種子的發(fā)芽率在70%左右，1份甘草種子的發(fā)芽率為54%，其它甘學(xué)-種子的發(fā)芽率都在40%以下，最低的發(fā)芽率只有12%a將種子用濃硫酸處理后，大部分甘草種子的發(fā)芽率均顯著增加（見圖3），處理后的發(fā)芽率都達(dá)到65%以上（除樣品7）。但是原發(fā)芽率在70%左右的4份種子的發(fā)芽率增加幅度較小，在15%以下，原發(fā)芽率在40%以下的5份甘草種子發(fā)芽率增加幅度較大，在33%~68%之間。只有樣品7的發(fā)芽率沒有變化。
　　2.5 硬實(shí)
　　不同來源甘草種子的硬實(shí)率相差非常大，變化范圍在20%~80%之間（除樣品7）。將種子用濃硫酸處理后，硬實(shí)率顯著下降（見圖4），有5份樣品的硬實(shí)率為0，其它樣品的硬實(shí)率也在3%以下。
　　2.6 霉變
　　從表2可知，甘草種子未處理直接發(fā)芽，其霉變率在15%以下，但將種子用濃硫酸處理后，各個(gè)樣品在發(fā)芽試驗(yàn)過程中，霉變大量增加（圖5），最低為9.3，最高達(dá)41.0%。

　　圖4 濃硫酸處理前后甘草種子的硬實(shí)率（%）

　　圖5 濃硫酸處理前后甘草種子的霉變率（%）
　　3 結(jié)論與討論
　　3.1 千粒重與種子直徑
　　內(nèi)蒙古和寧夏的甘草種子的千粒重及種子直徑要顯著高于新疆甘草種子，GuHui-yan等人曾研究過中國(guó)14個(gè)產(chǎn)地的甘草的甘草酸的含量，認(rèn)為內(nèi)蒙古的甘草質(zhì)量要好于新疆甘草。但林壽全（1993）的研究則認(rèn)為新疆甘草的甘草酸含量要高于其它產(chǎn)地。筆者認(rèn)為甘草種子的千粒重和大小與甘草的質(zhì)量可能存在一定的關(guān)系，有必要研究種子大小與成品甘草質(zhì)量之間的關(guān)系，為制定甘草種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)提供可靠的依據(jù)。中國(guó)1986年頒布的人參種子分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)就是以種子大小作為主要指標(biāo)劃分種子等級(jí)同。千粒重與種子直徑在新疆產(chǎn)地的甘草種子之間差異不顯著，說明千粒重、種子直徑與產(chǎn)地之間存在一定的關(guān)系，究竟是品種還是氣候、土壤等因素造成這種現(xiàn)象，還有待于進(jìn)一步研究。
　　3.2 凈度
　　不同來源的甘草種子凈度差別非常大，50%的種子樣品凈度達(dá)到80%以上。筆者認(rèn)為通過種子清選精選，可以進(jìn)一步提高種子的凈度。
　　3.3 發(fā)芽率
　　不同來源甘草種子的發(fā)芽率變化范圍較大，在12%~70%之間，用濃硫酸處理后，發(fā)芽率顯著增加，發(fā)芽率在65%~83%之間。
　　3.4 硬實(shí)
　　不同來源的甘草種子存在一定的硬實(shí)率，在20%~80%之間（樣品7除外）。甘草種子存在較高的硬實(shí)率，發(fā)芽以前必須經(jīng)過破硬實(shí)處理。在破硬實(shí)處理方面，已經(jīng)有大量的研究報(bào)告，所用的方法也多種多樣，如碾種法、硫酸浸種法、氫氧化鈉溶液浸種法、熱水浸種法、砂磨法、高溫浸種法等。
　　在實(shí)驗(yàn)中，采用了濃硫酸處理的方法，用濃硫酸處理以后，有5份樣品的硬實(shí)率為0，其它5份樣品的硬實(shí)率也在3%以下。說明濃硫酸可以有效地破除甘學(xué)一種子硬實(shí)。
　　在樣品處理前，通過放大鏡可以觀察到樣品2,3,4,5,7種子表面較粗糙，無光澤，不象其它種子表面那樣光滑，山此推斷這幾份種子可能進(jìn)行過機(jī)械破硬實(shí)處理，但是發(fā)芽試驗(yàn)的結(jié)果表明，除了樣品7,其它種子仍然存在一定的硬實(shí)率。
　　3.5 霉變率未用濃硫酸處理時(shí)，甘草種子的霉變率均在15%以下，用濃硫酸處理后，甘草種子的霉變率顯著增加，從9%~41%。這可能因?yàn)橛脻饬蛩崽幚砗螅�用清水沖洗過程中，種子受到一定的污染，而目_硬實(shí)破除以后，甘草種子內(nèi)部的甘草甜素等物質(zhì)更容易滲透出來，為霉菌的繁殖提供營(yíng)養(yǎng)，造成霉菌的迅速增長(zhǎng)。種子在未處理前，其發(fā)芽率與硬實(shí)率的總和要高于處理后的發(fā)芽率，其中原因就是霉變率太高，導(dǎo)致發(fā)芽率下降。
　　總的來說，中國(guó)市售甘學(xué)一種子質(zhì)量良蕎不齊，凈度、發(fā)芽率、硬實(shí)等差異均較大，而目_有的種子經(jīng)過破硬實(shí)處理，有的未經(jīng)處理。所有出售的甘草種子均無包裝及質(zhì)量、栽培說明，建立加強(qiáng)甘草種子質(zhì)量分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)及甘草種子檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的制定，以規(guī)范甘草種子市場(chǎng)。